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本导图详细展示了荧光原位杂交法（FISH）的基本概念、发展历程、工作原理、实验流程、应用领域，为读者提供了一个全面了解FISH技术的框架。
大纲
- 荧光原位杂交法（FISH）
- 简介
- 荧光原位杂交法（FISH）是一种生物影像技术，通过荧光标记的探针与染色体DNA结合，确定特定核酸序列在染色体、细胞或组织中的位置。
- 发展简史
- 基于放射性同位素原位杂交实验发展而来。
- 1977年，G.T.拉德金发展非同位素标记的原位杂交技术。
- 1985年，FISH在植物中应用。
- 1990年，P.M.内德洛夫使用多色FISH技术。
- 原理
- 利用碱基互补配对原则设计核酸探针。
- 非放射性物质标记探针，与单链DNA形成非共价键。
- 荧光检测体系在显微镜下检测特定DNA片段。
- 实验流程
- 样品制备
- 材料预处理、固定、去除细胞壁，制备染色体标本。
- 探针制备
- 设计与目的基因碱基互补配对的DNA或RNA片段。
- 探针标记
- 直接荧光素标记或通过生物素、地高辛标记。
- 杂交
- 探针变性、复性后与染色体标本在37℃下杂交。
- 洗脱
- 使用洗脱液处理杂交后的样品。
- 荧光显微镜检测
- 直接检测荧光亮度或通过抗体反应后检测。
- 结果分析
- 目的DNA的定位与定量分析。
- 样品制备
- 应用
- 基因定位、染色体结构分析、物种起源与进化关系研究、基因表达情况检测、物种鉴定、疾病与产前诊断、分子核型分析及光谱核型分析。
- 简介
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